細胞培養類(lèi)型可以分為貼壁細胞和懸浮細胞兩種，只有極少數類(lèi)型細胞同時(shí)存在兩種狀態(tài)。
懸浮細胞是指不需要依賴(lài)支持物，可在培養基中以懸浮狀態(tài)生長(cháng)的一類(lèi)細胞，如淋巴細胞和大部分血液系統來(lái)源細胞。（如小鼠白血病細胞WEHI-3, 人白血病細胞K-562, HL-60）。工業(yè)上也有越來(lái)越多的貼壁傳代細胞被馴化出來(lái)，進(jìn)行全懸浮的培養。目前在工業(yè)中應用的主要有SP2/0、NS0、CHO、BHK和HEK293細胞等，它們主要用于重組蛋白質(zhì)生產(chǎn)；在獸用生物制品中常用的傳代細胞主要有采用全懸浮培養的BHK21細胞、MDCK細胞；及借助微載體懸浮培養的Vero細胞、PK細胞、ST細胞、 Marc145細胞等，每種細胞的特性都不同。
一般情況下，懸浮細胞相較于貼壁細胞的處理更加簡(jiǎn)單一些，因為懸浮細胞傳代時(shí)無(wú)須胰酶消化。但這并不意味著(zhù)懸浮細胞比貼壁細胞好養，對新手來(lái)說(shuō)，反而更具挑戰性?？偸菚?huì )遇到各種各樣的問(wèn)題：比如，為什么總是出現死細胞和細胞分化；說(shuō)好了傳代很easy的，結果會(huì )出現分化；養好了凍存復蘇后又出現問(wèn)題了！
養好懸浮細胞，有如下大眾經(jīng)驗分享。
要點(diǎn)一：足夠的耐心，這是非常必要的
很多懸浮細胞在剛從凍存狀態(tài)復蘇時(shí)活力是相對較差的，此時(shí)我們需要有足夠的耐心，等待細胞完成自我修復進(jìn)入對數增長(cháng)期。比如THP-1（人單核細胞白血?。慕鈨龅交謴驼Ｔ鲋惩枰?-10天的恢復期；Jurkat，Clone E6-1(人T淋巴細胞白血病細胞)復蘇后也需要5-7天才能恢復到凍存前的狀態(tài)。新手可能會(huì )在此期間放棄培養，所以，請多一點(diǎn)耐心哦！培養這類(lèi)細胞也是培養耐心的過(guò)程呢！
要點(diǎn)二：接種密度的把握
一般來(lái)說(shuō)，懸浮細胞接種時(shí)密度不應低于50萬(wàn)個(gè)/ML，很多懸浮細胞有密度依賴(lài)，密度低導致的不增殖也是新手常見(jiàn)問(wèn)題之一。當然，有極少數細胞在密度高時(shí)反而狀態(tài)變差，如W6/32（小鼠B細胞雜交瘤細胞）。因此，培養不了解的細胞前查找相關(guān)資料去掌握細胞特性非常重要。
要點(diǎn)三：換液方法及頻率
換液頻率不應該被限制得“明明白白"，細胞是活物，在一個(gè)連續培養周期內，視細胞生長(cháng)狀態(tài)可分多次添加補充培養基、葡萄糖等特定營(yíng)養成份，維持細胞良好的生長(cháng)狀態(tài)。懸浮培養過(guò)程中，隨著(zhù)細胞的增殖，原有培養基中營(yíng)養物質(zhì)的消耗，代謝產(chǎn)物的增加，細胞的活率會(huì )下降，及時(shí)補充營(yíng)養物質(zhì)，使細胞處于一個(gè)相對良好的生存環(huán)境。切忌頻繁離心換液。參考換液方法：
①離心全換液法
即通過(guò)離心（800-1000rpm，5min）去除全部舊的培養基，更換新鮮培養基。該方法適合“皮實(shí)“好養的懸浮細胞換液(如K562)，或者當前細胞狀態(tài)良好、密度較高導致培養基消耗較大的情況。此方法的優(yōu)點(diǎn)是換液到位，能去除部分細胞碎片，但是同樣會(huì )對細胞造成一定程度的機械損傷。
②離心半換液法
即通過(guò)離心（800-1000rpm，5min）50%細胞懸液，更換50%體積的新鮮培養基。該方法適合比較“矯情“難養的細胞（如thp-1），或者正在調整狀態(tài)中、密度較低但碎片較多需要去除的情況。
③沉降換液法
即不使用離心機而是利用重力自然沉降的方法，將培養基與細胞分離，達到全部或部分更換新鮮培養基。但是其有應用局限性—只適合能成一定大小細胞團（否則無(wú)法自然沉降，只能低速離心）的細胞，尤其是處理依賴(lài)細胞聚集才能增殖的細胞時(shí)非常值得推薦，如NK-92、NK-92 MI、Jurkat。該方法能在換液過(guò)程中最大限度避免離心過(guò)程造成的機械損傷，同時(shí)保留聚集的細胞團，并且去除細胞碎片也較為干凈。
固定懸浮細胞，有如下私房經(jīng)驗分享。
養好懸浮細胞，需要用化合物等試劑刺激懸浮細胞，或者共培養。使用免疫熒光來(lái)檢查懸浮細胞，一直給很多新手，甚至高手造成心理陰影。如何固定好懸浮細胞？如何確保不掉片？甚至如何讓?xiě)腋〖毎N壁來(lái)做實(shí)驗？是很多實(shí)驗者的奢望。懸浮細胞固定/免疫熒光專(zhuān)用玻片給帶來(lái)解決方案。
如下是一些懸浮細胞固定后做的免疫熒光圖片，可以參考。
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